Skip to content

Wykrywanie mutacji w genie tyrozynazy u pacjenta z typem IA cystykołaczykowym bielactwo cd

3 tygodnie ago

503 words

Członkowie rodziny heterozygotyczni pod względem alpatii okołocerulkowej typu IA zostali zidentyfikowani na podstawie analizy aktywności enzymatycznej tyrozynazy w anagenowych cebulkach włosów. 11 Genotypy tyrozynazy przypisano przy użyciu polimorfizmu długości fragmentów TaqI w ludzkim genie tyrozynazy.15 Ten polimorfizm wytwarza fragmenty alternatywne rozmiary: 2,8 kb i 2,4 kb, które występują z jednakową częstotliwością wśród osób pochodzących z północnej Europy. Jak pokazano na Figurze 1, wszystkie cztery siostry z albinizmem alipologicznym typu IA były homozygotyczne pod względem polimorficznego fragmentu TaqI o wielkości 2,8 kb, a wszystkie osoby heterozygotyczne pod względem alpatii okołocznie w tej rodzinie miały co najmniej jeden fragment TaqI o wielkości 2,8 kb. Analiza sprzężeń dwupunktowych, przeprowadzona za pomocą programu LIPED, 16 wykazała całkowite połączenie między polimorfizmem długości fragmentów TaqI a występowaniem albinizmu oculacyjno-skórnego typu IA, z maksymalnym wynikiem wynoszącym 1,153 przy . = 0. Te dane są zatem zgodne z mutacjami alu-lizmem okołocerulkowym typu IA, które wpływają na gen tyrozynazy w tej rodzinie. Analiza hybrydyzacji Southern blot nie zidentyfikowała delecji ani innych rearanżacji w genach tyrozynazy probanda (dane nie pokazane). Sugerowało to, że jej alikwiokularyzacja była najprawdopodobniej wynikiem substytucji jednej zasady, która wpłynęła na biosyntezę, funkcję lub stabilność tyrozynazy. Aby dokładnie określić te nieprawidłowości, zamplifikowaliśmy segmenty genu tyrozynazy z jej genomowego DNA przez reakcję łańcuchową polimerazy18 i poddaliśmy je bezpośredniej analizie sekwencji DNA bez klonowania. W ten sposób analizy sekwencji próbkowały jednocześnie oba allele tyrozynazy pacjenta. W przypadkach eksonów 1, 2, 3 i 5 tylko amplifikowano sekwencje egzonu. W przypadku eksonu 4 amplifikowano cały ekson plus sąsiednie części sekwencji interweniujących.
Figura 2. Figura 2. Sekwencje DNA części egzonu 3 genu tyrozynazy. Ekson 3 zamplifikowano w reakcji łańcuchowej polimerazy i bezpośrednio zsekwencjonowano. Z powodu słabych fałszywych zatrzymań przy niektórych purynach, wszystkie sekwencje zostały określone na obu niciach co najmniej dwa razy, z produktami co najmniej dwóch niezależnych reakcji łańcuchowych polimerazy. Pokazana sekwencja jest sekwencją nici kodującej. Gwiazdki wskazują nieprawidłowe bazy. Pokazane sekwencje pochodzą od badanego pacjenta, matki pacjenta, ojca pacjenta i niespokrewnionej normalnej osoby.
Analiza sekwencji nukleotydowych DNA od tego pacjenta, amplifikowana przez łańcuchową reakcję polimerazy, ujawniła tylko trzy substytucje pojedynczej zasady. Jednym z nich był niepatologiczny polimorfizm w kodonie 174, miejscu, w którym zarówno TAT (tyrozyna), jak i TCT (seryna) występują z mniej więcej jednakową częstotliwością w genach tyrozynazy normalnych białek.21 W kodonie 174 nasz pacjent był homozygotyczny pod względem TAT, kodowanie tyrozyna. Jak pokazuje fig. 2, była ona również heterozygotyczna pod względem dwóch różnych substytucji missense w eksonie 3, która wydawała się być patogenna dla albinizmu okołowinowego. Pierwsza, ACA . AAA w kodonie 355, spowodowała substytucję Thr . Lys. Drugi, GAT . AAT w kodonie 365, spowodował zastąpienie Asp . Asn.
Rysunek 3. Rysunek 3. Sekwencja DNA regionu Exon 3
[hasła pokrewne: masa krytyczna fizyka, żołądek wielokomorowy, zwiotczenie przepony ]

0 thoughts on “Wykrywanie mutacji w genie tyrozynazy u pacjenta z typem IA cystykołaczykowym bielactwo cd”