Skip to content

Wykrywanie mutacji w genie tyrozynazy u pacjenta z typem IA cystykołaczykowym bielactwo czesc 4

2 miesiące ago

591 words

Pokazano sekwencję nici kodującej. Wskazano substytucje w kodonach 355 i 365. Aby określić, czy substytucje kodonów 355 i 365 są dziedziczone w cis (na tym samym chromosomie) lub w trans (reprezentującym dwa różne allele tyrozynazy), zsekwencjonowaliśmy także fragmenty egzonu 3 zamplifikowane przez reakcję łańcuchową polimerazy z genomowego DNA matka i ojciec pacjenta. Matka była heterozygotyczna tylko pod względem podstawienia w kodonie 355, a ojciec był heterozygotą tylko pod względem podstawienia w kodonie 365 (ryc. 2). Tak więc te dwie substytucje są dziedziczone niezależnie w trans, na dwóch różnych allelach tyrozynazy (ryc. 3).
Figura 4. Figura 4. Hybrydyzacja specyficzna dla allelu mutacji w kodonach 355 i 365. Oligonukleotydy odpowiadające normalnym i zmutowanym wersjom kodonów hybrydyzowano z fragmentami egzonu 3 od wskazanych osób, po amplifikacji przez łańcuchową reakcję polimerazy. Panel A pokazuje członków rodziny badań, a panel B nie wiąże niezależnych probandów z albinizmem oculacyjno-skórnym typu IA, z probandem z rodziny badawczej występującym jako proband 3.
Zweryfikowaliśmy obecność tych mutacji w genomowym DNA w badanej rodzinie przez swoistą dla allelu analizę hybrydyzacji, 20 przy użyciu sond oligonukleotydowych, które odpowiadały normalnym i zmutowanym formom kodonów 355 i 365. Fragmenty reakcji łańcuchowej eksonu 3 były amplifikowano z genomowego DNA członków rodziny nukleotydów i hybrydyzowano z jedną z czterech sond – tych dla normalnych i zmutowanych postaci kodonu 355 oraz tych dla normalnych i zmutowanych postaci kodonu 365. Jak pokazano na Figurze 4, proband a jej trzy siostry z albinizmem oczno-skórnym okazały się złożonymi heterozygotami pod względem mutacji w kodonie 355 i kodonie 365. Ich matka nosiła tylko zmutowany allel w kodonie 355, a ich ojciec nosił tylko zmutowany allel w kodonie 365, potwierdzając sekwencjonowanie DNA. dane. Brat 1, który był heterozygotyczny pod względem alucynacji okołowinowej, nosił matczyny zmutowany allel w kodonie 355, podczas gdy brat 2, nosiciel nie mający normalnych alleli.
Zastosowaliśmy to samo podejście, aby określić częstość występowania mutacji w kodonach 355 i 365 wśród pacjentów z albinizmem okołocerko-wowym z niedoborem tyrozynazy. W eksperymencie pokazanym na ryc. 4, przebadaliśmy osiem niepowiązanych probandów z albinizmem alipologicznym ujemnym pod względem tyrozynazy pod kątem mutacji w kodonach 355 i 365. Jak można się było spodziewać, probandem w naszej rodzinie badań (proband 3) była heterozygota złożona dla mutacji w kodonach. 355 i 365. Inny proband (proband 6) był homozygotyczny pod względem mutacji w kodonie 355. Pozostałe sześć probantów miało mutacje przy ani kodonie 355, ani kodonie 365 i dlatego nie zawierało innych, niezdefiniowanych mutacji genu tyrozynazy. Wykluczając proband z badanej rodziny, przeszukaliśmy 15 niezależnie zidentyfikowanych, niespokrewnionych probandów pochodzenia białego północnoeuropejskiego z albinizmem oculacyjno-skórnym typu IA dla mutacji w kodonach 355 i 365 (dane nie przedstawione). Tylko proband 6 miał mutację kodonu 355 (homozygotyczną), a żaden z probantów nie miał mutacji kodonu 365. Częstość występowania zmutowanych alleli w kodonach 355 i 365 w tej małej próbce probantów z albinizmem oculacyjno-skórnym typu IA wynosi odpowiednio około 7 procent i mniej niż 3 procent.
Dyskusja
Tyrozynaza jest enzymem zawierającym miedź, niezbędnym do biosyntezy melaniny w ssaczych komórkach barwnikowych.22 Enzym katalizuje pierwsze dwa etapy szlaku biosyntezy melaniny: utlenianie tyrozyny do dopa i późniejsze odwodornienie dopa do dopachinonu.5 Ludzka tyrozynaza to białko o masie 58 kDa, 23 528 aminokwasów o długości 8,9 10 Pacjenci z klasyczną albinizmem alipiopatycznym typu IA nie mają wykrywalnej aktywności tyrozynazy i dlatego całkowicie nie mają pigmentacji melaniny.
Pacjent z albinizmem omoczno-skórnym typu IA badał tu heterozygotę złożoną dla dwóch allelicznych podstawień jednej podstawy substytutów genu tyrozynazy, które zmieniają kodony 355 (Thr . Lys) i 365 (Asp . Asn)
[przypisy: żołądek wielokomorowy, funkcja poznawcza, nerwobóle żołądka ]

0 thoughts on “Wykrywanie mutacji w genie tyrozynazy u pacjenta z typem IA cystykołaczykowym bielactwo czesc 4”